支原體核酸法的靈敏度驗(yàn)證

支原體核酸檢測(cè)法（常規(guī)PCR、熒光定量PCR）

應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制藥工業(yè)和細(xì)胞治療等領(lǐng)域。

和傳統(tǒng)方法比較，它具有

①靈敏度高，特異性好。

②時(shí)間短，2-3小時(shí)出結(jié)果。

③操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，可替代傳統(tǒng)的培養(yǎng)法和DNA染色法。

在生物制藥工業(yè)和細(xì)胞治療領(lǐng)域，

歐洲藥典和日本藥典均要求對(duì)支原體核酸法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，

其中靈敏度的驗(yàn)證是關(guān)鍵的一個(gè)環(huán)節(jié)。

歐洲藥典和日本藥典要求，

如果用PCR法替代培養(yǎng)法檢測(cè)支原體時(shí)，此PCR檢測(cè)的靈敏度需達(dá)到10CFU/ml。

如替代DNA染色法，其靈敏度需達(dá)到100CFU/ml，并規(guī)定了支原體的范圍，即包含9種支原體（見(jiàn)下面表1）。

據(jù)小編市場(chǎng)調(diào)查后發(fā)現(xiàn)，德國(guó)MB公司（全稱Minerva Biolabs）生產(chǎn)的【10CFUTM支原體靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品】廣泛被國(guó)際和國(guó)內(nèi)各大藥廠所使用，被稱為該領(lǐng)域的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

其中，【10CFUTM支原體套裝】包含了歐洲藥典（EP 2.6.7）和日本藥典（JP, 17. edition, chapter G3）列舉的所有支原體物種，可用于qPCR和PCR方法的靈敏度以及耐用性驗(yàn)證，使得核酸法可作為傳統(tǒng)培養(yǎng)法和染色法的替代方法。

中文品名：10CFU?支原體靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品套裝

英文品名：10CFU? Mycoplasma Set Sensitivity Standard   

貨號(hào)：102-0002                   

生產(chǎn)商：德國(guó)MB公司

規(guī)格：共9種支原體10CFU標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉，每種標(biāo)準(zhǔn)品2管+陰性對(duì)照2管/盒

保存：凍干粉在2-8℃保存

表1.   EP 2.6.7和JP, 17規(guī)定的全部9種支原體標(biāo)準(zhǔn)品明細(xì)

說(shuō)明：

以上支原體10CFU?標(biāo)準(zhǔn)品也可單獨(dú)購(gòu)買。單獨(dú)購(gòu)買的規(guī)格為10CFU標(biāo)準(zhǔn)品3管+陰性對(duì)照2管/盒。另MB公司也提供10CFU的唾液支原體標(biāo)準(zhǔn)品。

01、產(chǎn)品特點(diǎn)

1> 來(lái)自英國(guó)菌種保藏中心NCTC，為標(biāo)準(zhǔn)支原體株

2> 支原體已滅活，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)室造成污染，保障細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室安全

3>傳代次數(shù)少，支原體無(wú)變異

4>產(chǎn)品為凍干粉，保證其穩(wěn)定性

5>分析證書（COA）提供該批次GU：CFU比值（支原體基因組/菌落數(shù)比值）

02、使用說(shuō)明

試劑使用前，先達(dá)到室溫平衡。

1>標(biāo)準(zhǔn)品管離心，以收集凍干粉至管底。

2> 每個(gè)管中添加1ml樣品基質(zhì)液（注：非待測(cè)樣本）。

3> 室溫靜置5分鐘。

4>渦旋振蕩10秒鐘，再離心10秒鐘。

5>使用合適的體積用于DNA抽取。推薦使用MB公司生產(chǎn)的支原體DNA提取試劑盒。該試劑盒一次所需樣本量為200μl。另需加內(nèi)控對(duì)照12μl，以監(jiān)測(cè)提取過(guò)程。

6> 取10ul抽提DNA用于PCR擴(kuò)增。

陰性對(duì)照樣品的制備，步驟同上。