如何準(zhǔn)備用于生長促進(jìn)曲線測定的細(xì)胞

　　要進(jìn)行細(xì)胞生長曲線的測定，來反映FBS的功能，需要先準(zhǔn)備足夠的有活力的細(xì)胞。威正翔禹/締一生物根據(jù)美國藥典（USP）的描述分析如何準(zhǔn)備用于生長促進(jìn)曲線測定的細(xì)胞。

　　用37℃水浴快速解凍一管FBS。計(jì)數(shù)細(xì)胞并觀察活力。用添加FBS的完全培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)細(xì)胞，具體遵循ATCC對相應(yīng)細(xì)胞提供的指導(dǎo)。鏡下觀察，保證細(xì)胞均一分布，貼壁或懸浮接近長滿。細(xì)胞再傳代，直至培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)足夠用于檢測（總細(xì)胞數(shù)需要1X10⁷個(gè)，活力大于90%）。

　　收獲細(xì)胞時(shí)，先棄掉上清，用不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基沖洗；對貼壁細(xì)胞，加1 mL of Trypsin/EDTA消化，必要時(shí)用1ml不低于10%FBS的培養(yǎng)基中和。離心，棄上清，細(xì)胞重懸。此時(shí)，細(xì)胞即可用于接種。

　　接種細(xì)胞時(shí)，應(yīng)測試**的接種密度，起始密度范圍為2×10³~2×10⁴活細(xì)胞/mL。選取至少5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，3個(gè)復(fù)孔，以確定細(xì)胞**接種密度。在37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱孵育。對7天內(nèi)的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行拍照（第0,1,2,3,4,7天）。應(yīng)采用待測試的血清和USP的參考血清，測試三種血清濃度。記錄下每種條件下細(xì)胞的匯合度。在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)上收獲細(xì)胞。對細(xì)胞總數(shù)和活力進(jìn)行計(jì)數(shù)。

　　綜上所述，您是不是已經(jīng)對如何準(zhǔn)備用于生長促進(jìn)曲線測定的細(xì)胞，有所了解。如果還有其他疑問，請咨詢威正翔禹/締一生物資深專家免費(fèi)熱線：400-166-8600。