Biocoll細(xì)胞分離液

Biocoll細(xì)胞分離液是最早由德國Biochrom公司推出的新一代分離液。它除了可分離淋巴細(xì)胞外，更常用于胰島細(xì)胞的分離。胰島細(xì)胞的移植是一種有效的糖尿病新型療法，可解決特別是I型糖尿病患者的胰島細(xì)胞不足及功能低下的問題。

早在2006年，就有文獻(xiàn)報道Biocoll細(xì)胞分離液可有效分離胰島beta細(xì)胞，細(xì)胞活力和功能都維持良好。但在應(yīng)用Biocoll細(xì)胞分離液時，應(yīng)注意如下事項（以下僅供參考，具體還需實驗者自我確定最終方案）：

一、分離方法會影響胰島的產(chǎn)率和存活率：

因此，取材時需要注意

1.胰臟應(yīng)快速取材，保持包膜完整。

2.建議采用UW溶液運輸。

3.對胰臟進(jìn)行評估，在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。

4.消化過程不宜進(jìn)行震蕩，以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化，而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。

5.要保證胰島的包膜完整，消化不能太充分。寧可不足，也不可過頭，否則會影響胰島純化的產(chǎn)率。

二、分離胰島細(xì)胞時的注意事項：

1. biocoll分離液使用時，是采用連續(xù)密度梯度，需要分別配制密度為1.065g/mL（UW溶液與Biocoll混合）和密度為1.095 g/mL（UW溶液與Biocoll混合）的溶液，二者再混合。

2. 分離時離心1800rpm，可考慮離心10分鐘，之后使COBE細(xì)胞分離機(jī)保持4℃，防止酶激活導(dǎo)致結(jié)構(gòu)完整性破壞。

3. 胰島在最輕密度層，隨著密度增加，也會有部分胰島，但外分泌組織也會增多。

Biocoll細(xì)胞分離液（貨號L6155）為澄清無色無菌溶液，密度為
1.10 g/ml
，500ml/瓶。它含有一種高分子聚合物，分子量約為400kDda，為即用型，也可用去鈣鎂離子的PBS調(diào)整密度。它內(nèi)毒素低（＜2IU/ml），可保護(hù)細(xì)胞。使用時可按下列流程進(jìn)行：

1.分別將7mL和10mL
Biocoll細(xì)胞分離液（D=1.077g/mL,20℃）放入15mL和25mL的離心管中。

2.將肝素化抗凝全血（50U/mL肝素,無穩(wěn)定劑）與等體積培養(yǎng)基混合均勻，小心添加在Biocoll細(xì)胞分離液的液面上。

3.1200g離心20min。用巴斯德吸管吸取（70-100%）淋巴細(xì)胞富集層（位于血漿和Biocoll之間），加入培養(yǎng)基中洗2次，*300g離心10min.*200g離心10min，即得所需淋巴細(xì)胞，可以按常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)等實驗。

附1：血細(xì)胞在連續(xù)密度梯度中的分布

附2：用去鈣鎂離子的PBS稀釋Biocoll的配比公式

D1：要配制的密度（如1.06）

D： 不含鈣鎂離子的PBS的密度（1.005）

D2：母液的密度（1.10）

V%: 應(yīng)加母液的百分比

目前Biocoll細(xì)胞分離液(L6155)備有現(xiàn)貨，歡迎垂詢。

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