三種HiMedia顯色培養(yǎng)基的性能評(píng)估

2013年，在《環(huán)境與可持續(xù)發(fā)展國(guó)際期刊》上，埃及國(guó)家研究中心水污染研究部及扎加齊克大學(xué)（Zagazig）微生物學(xué)系對(duì)HiMedia公司生產(chǎn)的三款顯色培養(yǎng)基的性能進(jìn)行了評(píng)估。這3款顯色培養(yǎng)基分別為：

1）HiCrome Aureus Agar Base及添加劑

2）M-CP Agar Base及添加劑

3）HiCrome Candida Differential Agar及添加劑

它們分別用于檢測(cè)水中的金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌和白色念珠菌。研究人員對(duì)HiMedia的顯色培養(yǎng)基的靈敏度、特異性和檢測(cè)閾限進(jìn)行了評(píng)估。他們總共檢測(cè)了140個(gè)水的樣品，包括40個(gè)地下水水樣，70個(gè)尼羅河河水樣本，20個(gè)廢水樣本，10個(gè)海水樣本。分離的陽(yáng)性菌落用PCR方法進(jìn)行了確證。結(jié)果顯示，這些顯色培養(yǎng)基快速、特異、靈敏。

研究人員之所以開(kāi)展這項(xiàng)研究，是因?yàn)楸M管美國(guó)APHA于2005年發(fā)布了水和廢水檢驗(yàn)的美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)方法，但仍存在一些相關(guān)問(wèn)題，如病原體的難以鑒定，鑒定和分型所花的時(shí)間較長(zhǎng)，支出較多。另外，水體需要長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)病原體，這需要較好的監(jiān)測(cè)方法和篩查程序。顯色培養(yǎng)基現(xiàn)在已逐漸被接受，并被納入了標(biāo)準(zhǔn)方法。顯色培養(yǎng)基的種類(lèi)和品牌也越來(lái)越多，一個(gè)顯色培養(yǎng)基有時(shí)會(huì)采用多種顯色劑，例如針對(duì)不同酶的產(chǎn)生綠色和紅色的顯色劑，這樣可形成綠色、紅色和紫色菌落。

在HiMedia這三種顯色培養(yǎng)基中，金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基在35-37℃孵育24-48小時(shí)，結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌為棕黑色菌落，有透明帶。M-CP培養(yǎng)基為厭氧培養(yǎng)44℃24-48小時(shí)，產(chǎn)氣莢膜梭菌菌落為黃色菌落，并在接觸氨氣后30秒內(nèi)變?yōu)榉奂t色。念珠菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)30℃，40-48小時(shí)，白色念珠菌為淡綠色平滑菌落。由于均為水樣本，研究人員采用的是膜過(guò)濾的方法，濾膜孔徑為0.45m。研究人員用無(wú)菌鑷子將濾膜放到濾器上進(jìn)行樣本過(guò)濾，再將可能含有致病菌的水樣過(guò)濾后的濾膜放到無(wú)菌平板上培養(yǎng)。

結(jié)果顯示，對(duì)于金葡菌顯色培養(yǎng)基的假陰性率和假陽(yáng)性率均為0, 棕褐色為陰性菌；M-CP培養(yǎng)基上的綠色菌落為陰性菌落；念珠菌顯色培養(yǎng)基上，每90個(gè)菌落中就有9個(gè)為淺綠色陽(yáng)性菌落，假陰性有1個(gè)（假陰性率為10%），為藍(lán)色菌落，假陽(yáng)性率則為0。研究人員還發(fā)現(xiàn)，不存在非典型菌株顯示典型菌株的典型顏色。最終結(jié)論是，金葡和M-CP的靈敏度和特異性均為100%，而念珠菌顯色培養(yǎng)基靈敏度為90%，特異性為100%。

研究人員還就140個(gè)不同水樣的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，得出顯色培養(yǎng)基對(duì)于不同水樣的靈敏度和特異性，見(jiàn)下表：

關(guān)于檢測(cè)閾限，研究人員分別用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)菌落摻入到水樣品中測(cè)試（具體濃度包括1-20CFU/100mL、20-80CFU/100mL、80-500CFU/100mL）。結(jié)果顯示，三種顯色培養(yǎng)基的對(duì)目標(biāo)微生物的檢測(cè)閾限均小于20CFU/100mL，檢測(cè)閾限很低。

作者認(rèn)為，傳統(tǒng)的水樣病原菌的檢測(cè)和計(jì)數(shù)方法非常耗時(shí)，且需要大量的確證試驗(yàn)。并且，仍然需要快速靈敏的水中病原微生物的檢測(cè)手段，特別是對(duì)于飲用水。研究人員指出，HiMedia的金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基，性能甚至優(yōu)于市面上的科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（科瑪嘉顯色培養(yǎng)基的靈敏度為76%，特異性為90%）。

最后，作者歸納說(shuō)：總之, Mediad的這三款顯色培養(yǎng)基非常適合用于常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室日常工作，特別是它不需要任何的確證試驗(yàn)。

HiMedia顯色培養(yǎng)基顯色結(jié)果圖（僅供參考）

圖1. HiCrome Aureus Agar Base（貨號(hào)M1468）

圖2. M-CP Agar Base（貨號(hào)M1354）

圖3. HiCrome Candida Differential Agar（貨號(hào)M1297A）

參考文獻(xiàn)

Raed S. Al-Wasify, Al-Sayed A. Al-Sayed and Mohamed M. Kamel. Sensitivity and Specificity of Chromogenic Media for Detection of Some Pathogens in Water. International Journal of Environment and Sustainability. 2013,2(1):1-9