常用的幾種生理生化鑒定實(shí)驗(yàn)

大分子物質(zhì)水解反應(yīng)

生物對大分子的淀粉、蛋白質(zhì)和脂肪不能直接利用，必須靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解才能被微生物吸收利用。胞外酶只要為水解酶，通過加水裂解大的物質(zhì)為較小的化合物，使其能被運(yùn)輸至細(xì)胞內(nèi)。

淀粉酶水解淀粉為小分子的糊精、雙糖和單糖；脂肪酶水解脂肪為甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白質(zhì)為氨基酸等。這些過程均可通過觀察細(xì)菌菌落周圍的物質(zhì)變化來證實(shí)；淀粉遇碘液會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色，但細(xì)菌水解淀粉的區(qū)域，用碘測定不在產(chǎn)生藍(lán)色，表明細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶。脂肪水解后產(chǎn)生脂肪酸可改變培養(yǎng)基的pH，使pH降低，加入培養(yǎng)基的中性紅指示劑會(huì)使培養(yǎng)基從淡紅色變成深紅色，說明胞外存在著脂肪酶。

糖發(fā)酵試驗(yàn)

糖發(fā)酵試驗(yàn)是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng)，在腸道細(xì)菌的鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是它們在分解糖類物質(zhì)的能力上有很大的差異。有些細(xì)菌能分解某種糖產(chǎn)生有機(jī)酸（如乳糖、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫氣、甲烷、二氧化碳的等）；有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。例如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；傷寒桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能分解乳糖；普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能分解乳糖。

發(fā)酵培養(yǎng)基含有蛋白胨，指示劑（溴甲酚紫），倒置的德漢氏小管和不同的糖類。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，溴甲酚紫指示劑可由紫色（pH6.8）變?yōu)辄S色（pH5.2）。氣體的產(chǎn)生可由倒置的德漢氏小管中有無氣泡來證明。

IMViC反應(yīng)

IMViC反應(yīng)是吲哚試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、伏-普試驗(yàn)和檸檬酸試驗(yàn)4個(gè)試驗(yàn)的首字母縮寫。這四個(gè)實(shí)驗(yàn)主要是用來快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌，多用于水的細(xì)菌檢查。

吲哚試驗(yàn)：某些細(xì)菌有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸形成吲哚（靛基質(zhì)），吲哚能與對二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈紅色。

甲基紅試驗(yàn)：某些細(xì)菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步被分解成為甲酸、乙酸、琥珀酸等，使培養(yǎng)基pH下降至4.5以下，加入甲基紅指示劑可呈紅色。如細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸量少，或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)（如醇、醛、酮、氣體和水），培養(yǎng)基pH在5.4以上，加入甲基紅指示劑呈橘黃色。本試驗(yàn)常與V-P試驗(yàn)一起使用，因?yàn)榍罢叱赎栃缘募?xì)菌，后者通常為陰性。

伏-普（二乙酰）試驗(yàn)：某些細(xì)菌能發(fā)生如下轉(zhuǎn)換：葡萄糖→丙酮酸（脫羧）→乙酰甲基甲醇→2，3—丁烯二醇，在有堿存在時(shí)氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用產(chǎn)生粉紅色的化合物。本試驗(yàn)?zāi)康脑谟跍y定細(xì)菌產(chǎn)生乙酰甲基甲醇的能力。

檸檬酸試驗(yàn)：當(dāng)細(xì)菌利用銨鹽作為**氮源，并利用檸檬酸鹽作為**碳源時(shí)，若細(xì)菌能利用這些鹽作為氮源和碳源而生長，則能利用檸檬酸鈉產(chǎn)生碳酸鹽，從而與利用銨鹽產(chǎn)生的氨反應(yīng)，形成NH4OH，使培養(yǎng)基呈堿性，使指示劑溴麝香草酚藍(lán)（BTB）由淡綠轉(zhuǎn)為深藍(lán)。

生化反應(yīng)種類繁多，操作復(fù)雜過程繁瑣，耗時(shí)較長，現(xiàn)市面上已出現(xiàn)生理生化反應(yīng)試劑盒，但市面上試劑盒產(chǎn)品魚目混雜，質(zhì)量難以保證，那么如何選擇一款高品質(zhì)，操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確的鑒定試劑盒呢？

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一個(gè)生化鑒定卡上集成了12種或24種生化試驗(yàn)，細(xì)菌實(shí)驗(yàn)包括IMViC試驗(yàn) ：吲哚（I）、甲基紅（M）、VP（V）、檸檬酸鹽利用（C）四種試驗(yàn)常用于鑒定腸道桿菌，合稱為IMViC試驗(yàn)、碳水化合物代謝實(shí)驗(yàn)、氨基酸代謝實(shí)驗(yàn)、苯丙氨酸脫氨基實(shí)驗(yàn)（丙氨酸脫氨酶實(shí)驗(yàn)）

、尿素代謝實(shí)驗(yàn)（尿素分解酶實(shí)驗(yàn)）、丙二酸鹽代謝實(shí)驗(yàn)、ONPG實(shí)驗(yàn)（β-半乳糖苷酶實(shí)驗(yàn) ）

、葡萄糖醛酸酶檢測實(shí)驗(yàn)、硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)、七葉靈水解實(shí)驗(yàn)、硫化氫產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)、運(yùn)動(dòng)性檢測實(shí)驗(yàn)、過氧化氫酶實(shí)驗(yàn)（觸酶實(shí)驗(yàn)）、氧化酶實(shí)驗(yàn)、耐鹽實(shí)驗(yàn)、吡咯烷酮酶實(shí)驗(yàn)（PYR實(shí)驗(yàn)）、堿性磷酸酶實(shí)驗(yàn)。

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