李斯特菌顯色培養(yǎng)基的應(yīng)用

李斯特菌屬( Listeria．spp) 經(jīng)常存在于各種動(dòng)物和環(huán)境中，來(lái)源于土壤和水中的李斯特菌可能污染人類(lèi)消費(fèi)品，特別是即食食品。與其他常見(jiàn)致病菌相比，單核細(xì)胞增生李斯特菌的感染率雖然較低，但致死率高達(dá) 20%～50%。因此，高效精確地從食品等樣品中分離和鑒別出單核細(xì)胞增生李斯特菌，對(duì)食品質(zhì)量控制和疾病預(yù)防治療有重要意義。

ISO、FDA 及我國(guó)衛(wèi)生部推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法和替代方法是用 PALCAM 和顯色培養(yǎng)基進(jìn)行檢測(cè)和分離。傳統(tǒng)的PALCAM 經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的應(yīng)用驗(yàn)證，能有效地分離李斯特菌，但無(wú)法區(qū)分致病和非致病的李斯特菌，另外許多七葉苷陽(yáng)性的菌也會(huì)產(chǎn)生一些假陽(yáng)性及干擾。

近年來(lái)興起的李斯特菌顯色培養(yǎng)基，通常是采用屬特異性β－葡萄糖苷酶和磷脂酰肌醇或膽堿酶顯色技術(shù)。平板制備時(shí)對(duì)磷脂酰肌醇或膽堿配套試劑要求嚴(yán)格，溫度過(guò)高會(huì)產(chǎn)生絮狀物，難以觀察到菌落特征，溫度過(guò)低又易凝固而不能再次加熱溶解。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中顯色培養(yǎng)基的質(zhì)量，直接決定實(shí)驗(yàn)的成敗。推薦使用進(jìn)口產(chǎn)品，HiMedia公司（國(guó)際知名微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商）生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基，其他顯色培養(yǎng)基廠家比較，HiMedia顯色培養(yǎng)基在普通顯色培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良，形成自己獨(dú)特產(chǎn)品，顯色效果區(qū)分明顯，特異性較強(qiáng)，產(chǎn)品種類(lèi)更豐富。如對(duì)于李斯特菌的檢測(cè)，目前有5款產(chǎn)品可以選擇。

產(chǎn)品1：?jiǎn)卧隼钏固厥暇@色培養(yǎng)基（貨號(hào)：MV1540）

選擇鑒別性分離單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。

它的特點(diǎn)是可區(qū)分單增李斯特氏菌與英諾克李斯特氏菌，但無(wú)法區(qū)分單增李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌。該培養(yǎng)基完全符合我國(guó)食品安全檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)GB4789.30-2016，國(guó)標(biāo)首選 ALOA法。

原理：依據(jù)李斯特菌特有的β-葡糖苷酶及磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C（PIPLC）活性。

產(chǎn)品2：HiCrome單增李斯特氏菌鑒別瓊脂基礎(chǔ)（貨號(hào)：M2009）

與貨號(hào)MV1540不同的是依據(jù)李斯特菌的β-半乳糖苷酶和磷脂酰膽堿特異性磷脂酶C（PCPLC活性）注：不是PIPLC

產(chǎn)品3：HiCrome單增李斯特氏菌快速鑒別瓊脂基礎(chǔ)（貨號(hào)：M1924）

該培養(yǎng)基適用于快速鑒定和鑒別單增李斯特菌，并與其他李斯特菌菌種區(qū)分。

原理：除了依據(jù) “β-葡糖苷酶”、和“PIPLC活性”外，增加了“鼠李糖發(fā)酵”的檢測(cè)，從而對(duì)綿羊李斯特菌（伊氏李斯特氏菌）、英諾克李斯特菌和單增李斯特氏菌三者能夠進(jìn)行區(qū)分。

產(chǎn)品4：?jiǎn)卧隼钏固厥暇?yàn)證瓊脂基礎(chǔ)（MV1552）

用于從臨床和食品樣本選擇性分離鑒別單核細(xì)胞增生李斯特菌。

原理：依據(jù)PIPLC活性和α-甲基-D-甘露糖苷的發(fā)酵。

它不是顯色培養(yǎng)基，但能區(qū)分單增李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和英諾克李斯特氏菌。

產(chǎn)品5：HiCrome李斯特氏菌瓊脂基礎(chǔ)（M1417，M1417F）

從食品和臨床樣本中快速選擇、鑒別、鑒定李斯特菌。

M1417、M1417F均能鑒別出李斯特菌。此外，M1417還能鑒別是否發(fā)酵鼠李糖，M1417F能鑒別是否發(fā)酵木糖，因而能區(qū)分伊氏和單增。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，可以根據(jù)具體的需求進(jìn)行選擇，HiMedia公司生產(chǎn)的顯色培養(yǎng)基與傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比，克服了傳統(tǒng)培養(yǎng)基在各種細(xì)菌分離、鑒別、計(jì)數(shù)等操作過(guò)程中比較復(fù)雜（需要有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員）、耗時(shí)較長(zhǎng)、敏感性低和特異性差的缺點(diǎn)。

Himedia顯色培養(yǎng)基在檢測(cè)細(xì)菌時(shí)，通常培養(yǎng)24小時(shí)通過(guò)觀察菌落顏色即能用肉眼對(duì)細(xì)菌進(jìn)行定性或定量分析，既縮短了檢測(cè)時(shí)間，減少了生化鑒定的過(guò)程，極大提高工作效率。

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