論李斯特氏菌的鑒定

在食品安全國標方法中，樣品在增菌后用李斯特氏菌顯色平板進行分離，然后挑取可疑菌落進行鑒定。具體鑒定是挑取可疑菌落，然后分別接種木糖和鼠李糖發(fā)酵管。單增李斯特氏菌是木糖（-）鼠李糖（+），然后選這樣的純培養(yǎng)物繼續(xù)鑒定。

接下來的鑒定方法有：

?染色鏡檢

?動力試驗

?過氧化氫酶試驗：如陽性，再進行下面的糖發(fā)酵和MR-VP試驗等。

?糖發(fā)酵試驗：包括葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、鼠李糖、木糖、七葉苷。

?MR-VP試驗：MR是甲基紅，指葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸，甲基紅為pH指示劑呈紅色。VP試驗也是鑒定葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)物的。該試驗是在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中進行，要分別培養(yǎng)2-5天和2-4天，再滴加甲基紅試劑盒或VP試劑進行鑒定，如有葡萄糖發(fā)酵，則均為紅色。

?溶血試驗

?協(xié)同溶血試驗

HiMedia Laboratories公司生產(chǎn)有李斯特氏菌生化鑒定盒（貨號KB012A），內(nèi)有生化鑒定卡，卡上集成了12種生化反應(yīng)，可鑒定7種李斯特氏菌。具體這12種生化反應(yīng)如下：

1
過氧化氫酶試驗

2
硝還原試驗

3
七葉苷水解實驗

4
VP試驗

5
甲基紅試驗

6
木糖發(fā)酵試驗

7
乳糖發(fā)酵試驗

8
葡萄糖發(fā)酵試驗

9
α-甲基-D-甘露糖苷發(fā)酵試驗

10
鼠李糖發(fā)酵試驗

11
蔗糖發(fā)酵試驗

12
甘露醇發(fā)酵試驗

以上試驗與國標提到的方法大部分重合，如包括過氧化氫酶試驗、糖發(fā)酵試驗（只是不包括麥芽糖）、MR-VP試驗。只是不含溶血試驗。其實關(guān)于溶血反應(yīng)，國標中的顯色培養(yǎng)基所基于的PIPLC就是一種溶血素，PIPLC陽性即可看作具有溶血環(huán)。

HiMedia Laboratories公司還生產(chǎn)有一款包含動力學檢查的李斯特氏菌生化鑒定卡（貨號KBM003A），具體試驗類型同上，只是沒有蔗糖發(fā)酵反應(yīng)，但有動力學檢查。有報道，關(guān)于生化鑒定，集成化的生化鑒定卡（或試條）已可完全取代生化鑒定管的各項試驗。

HiMedia Laboratories公司還提供了幾款李斯特氏菌的鑒定培養(yǎng)基，如 M1924 、MV1552，主要集中在對英諾克李斯特、單增李斯特和伊氏李斯特三者的區(qū)分上。和原有顯色平板相比，只是多了一項糖發(fā)酵的檢測。因國標法中的顯色平板（ALOA法）無法區(qū)分單增和伊氏李斯特，所以這兩款培養(yǎng)基可謂是進一步的鑒定。

有報道說，當單增李斯特菌與英諾克李斯特菌按10cfu:10cfu和10cfu:100cfu比例混合時，顯色培養(yǎng)基上只能看到英諾克生長，英諾克對單增李斯特菌有抑制，從而造成假陰性，這是需要注意的地方。

另有報道李斯特菌顯色培養(yǎng)基的陽性符合率較高，品質(zhì)較好的可達100%或90%以上，所以生化鑒定其實對于李斯特菌的定量來說，更為重要（通常食品檢驗只需定性），主要是為了避免假陽性的存在。因此，如果嚴格按照國標，則顯色培養(yǎng)基搭配生化鑒定卡，已足以滿足要求。如果想更加便捷，則采用顯色培養(yǎng)基（ALOA法，MV1540）和鑒定顯色培養(yǎng)基（M1924）就可以了。