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細胞傳代干貨,建議收藏

2022-04-20 16:46來源:威正翔禹|締一生物

Cell Culture

什么是細胞傳代?

細胞傳代培養(yǎng)(subculture),當原代培養(yǎng)成功以后,隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂,一則細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制,生長速度減慢甚至停止;另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。


將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內,再進行培養(yǎng)的過程被稱之為細胞傳代培養(yǎng)。對單層培養(yǎng)而言,80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。


Vol .1

耗材準備


在實驗開始前,需要把實驗用品準備齊全。


酒精、預熱好的完全培養(yǎng)基、PBS緩沖液、胰酶、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿、移液器、移液管、離心管等


實驗用的超凈工作臺需提前半小時照射紫外線。


Vol .2

實驗操作

以貼壁細胞培養(yǎng)為例


1、穿好細胞房專用的實驗服,戴好滅菌手套和口罩。


2、從培養(yǎng)箱中取出細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿(Tip1:一般選擇處于對數(shù)期的細胞),用75%酒精消毒外包裝后轉移至到超凈臺中。


3、打開蓋子Tip2:如果是培養(yǎng)皿,只需打開一個縫隙即可,避免污染),輕輕吸出舊的培養(yǎng)液,加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次(Tip3:注意從未培養(yǎng)細胞的側壁加入,以免沖掉細胞),棄去PBS緩沖液。


4、用移液器加入適量胰酶(Tip4:具體量根據實驗需要確定,提前將胰酶37℃預熱,效果更好),蓋好蓋子,“十字”晃動,使胰酶充分接觸細胞。


5、將加入胰酶的細胞培養(yǎng)瓶轉移到倒置顯微鏡載物臺,鏡下觀察細胞消化情況,當細胞變圓且大量脫落時,準備終止消化(Tip5:若初始的細胞密度比較高,加入胰酶后,肉眼也可觀察到細胞脫落,當細胞有一左右脫落時,即可終止消化,避免反復將培養(yǎng)皿拿出超凈臺,避免增加污染的風險),用75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶表面,轉移到超凈臺。


6、用移液器加入等量含血清培養(yǎng)基,終止消化。移液器充分且柔和地吹打,避免產生氣泡,使細胞完全脫落。


7、將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中混合液體轉移至離心管中(離心管規(guī)格根據實驗需要確定),配平后離心3-5分鐘左右(離心機轉速根據細胞種類而定,常見的有1000-3000rpm/min)。


8、離心好后,用酒精噴壺噴灑離心管表面,轉移進超凈臺,打開蓋子,將上清液倒入廢液缸。


9、加入適量體積含血清培養(yǎng)基,用移液器或巴氏吸管輕輕吹打,制成細胞懸液。


10、將細胞懸液分裝進2個(或多個)潔凈滅菌培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,加入適量培養(yǎng)基,蓋好蓋子。


11、將分裝好的培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡載物臺,觀察細胞情況,細胞應保證一定數(shù)量,數(shù)量太少會影響生長情況。


12、在培養(yǎng)瓶上做標記,注明傳代時間,細胞種類,操作人員等信息。在放入培養(yǎng)箱之前應再次用酒精噴一噴培養(yǎng)瓶表面,然后應記得整理操作臺,用75%酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。




好物推薦 ?

Ausbian

血清在細胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻:


  • 提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。

  • 提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調節(jié)它們所結合的物質活力。

  • 有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。

  • 是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。

  • 起酸堿度緩沖液作用。

  • 提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。

  • 參與細胞凍存。

    ......


一款優(yōu)質的血清,絕對能成為細胞實驗的“最強輔助”。


Ausbian進口特級胎牛血清與市面上其他品牌血清相比,有獨特優(yōu)勢:

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特級胎牛血清、細胞治療專用胎牛血清(貨號:WS500T(紅點)),透析胎牛血清 (貨號:VS500TZ   )等多系列產品,服務更專業(yè)更精準。



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